淋巴細(xì)胞的分離方法有哪些?
更新時(shí)間:2020-03-17 點(diǎn)擊次數(shù):4865
淋巴細(xì)胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異,通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來。分離純度:使用人淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞的分離純度大于90%。
淋巴細(xì)胞分離方法有哪些?主要包括粘附貼壁法,吸附柱過濾法,磁鐵吸引法。
一、粘附貼壁法:
將已制取的單獨(dú)核細(xì)胞懸浮液傾于玻璃或塑膠培養(yǎng)皿或偏平小瓶中,挪到37℃溫箱浸泡1小時(shí)上下,淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞均貼于平皿內(nèi)壁,而未貼壁的非粘附細(xì)胞基本上為純淋巴細(xì)胞,繼用橡皮刮去貼壁的細(xì)胞即是純單核細(xì)胞群。因細(xì)胞也是貼壁現(xiàn)象,用這樣的方法可以分開的淋巴細(xì)胞群中細(xì)胞進(jìn)而損害。
二、吸附柱過濾法:
將單獨(dú)核細(xì)胞懸浮液引入配有玻纖或葡聚糖疑膠的柱層中,凡有粘附潛質(zhì)的細(xì)胞絕大多數(shù)被吸咐而黏滯在柱層中,從柱上洗脫下來的細(xì)胞關(guān)鍵是淋巴細(xì)胞。此法行之有效,對(duì)細(xì)胞很少損傷。
三、磁鐵吸引法:
運(yùn)用單核細(xì)胞具備吞噬的特點(diǎn),在單獨(dú)核細(xì)胞懸浮液中加直徑為3µm的顆粒,置37℃溫箱里暫時(shí)性轉(zhuǎn)動(dòng)搖晃,待單核細(xì)胞充足吞食顆粒后,用磁石將細(xì)胞吸至管頂,頂層液中含較純的淋巴細(xì)胞。