一、我是誰？

外泌體是由所有細(xì)胞釋放的一類胞外囊泡，比細(xì)胞小很多，大小范圍為40—150nm。與細(xì)胞類似，外泌體由脂質(zhì)雙分子層膜構(gòu)成，膜上含有各種標(biāo)志性蛋白，可用于外泌體的鑒定和分離。內(nèi)含物中包含特定蛋白質(zhì)、RNA（mRNA、miRNA、IncRNA等）和DNA，其中miRNA的占比最多。外泌體除了存在于血漿、血清、尿液、腦脊液等人體體液中，還存在各種組織中，可以說外泌體在人體中無處不在。

圖1 外泌體的組成

二、我的功能有哪些？

外泌體的功能取決于它們與受體細(xì)胞相互作用的能力，并將它們的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸傳遞到這些細(xì)胞。與靶細(xì)胞結(jié)合的特異性取決于粘附分子，如整合素。外泌體參與多種功能如調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄翻譯、細(xì)胞增殖與凋亡、轉(zhuǎn)移與侵襲、血管生產(chǎn)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞分化、代謝調(diào)控、病毒免疫-------功能決定應(yīng)用，外泌體的應(yīng)用主要在疾病治療、生物標(biāo)志物、藥物遞送等三大領(lǐng)域。

圖2 外泌體的功能

三、我的應(yīng)用熱點(diǎn)有哪些？

圖3 外泌體的發(fā)展歷程

自從2013年外泌體領(lǐng)域科學(xué)家獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，外泌體研究熱度高居不下。2019年外泌體基礎(chǔ)性研究經(jīng)費(fèi)超過2億，大量高質(zhì)量文章涌現(xiàn)。其中在臨床癌癥研究中，一篇發(fā)表于2021年的文章表明外泌體PKM能傳遞NSCLC4療耐藥性，缺氧誘導(dǎo)下順鉑耐藥肺癌細(xì)胞通過外泌體PKM2向敏感細(xì)胞傳遞耐藥性。在體外診斷應(yīng)用中，有研究表明外泌體能夠作為腫瘤診斷和分類的可靠標(biāo)志物，可為不同類型的腫瘤的早期檢測(cè)提供新視角。在心血管疾病應(yīng)用中，移植的心肌球來源的細(xì)胞（CDCs）分泌可使細(xì)胞恢復(fù)年輕的外泌體，年輕的CDCs通過調(diào)節(jié)心臟基因表達(dá)、心臟功能、運(yùn)動(dòng)能力等方面使年老動(dòng)物恢復(fù)青春。那么在免疫學(xué)研究中，有研究報(bào)道指出：多發(fā)性硬化（MS）患者中的循環(huán)外泌體可通過let-7i靶向生長因子1受體（IGF1R）和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFBR1）等來抑制Treg細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)MS的發(fā)病機(jī)理。同時(shí)由于外泌體很好的生物相容性及具有保護(hù)性的脂質(zhì)雙分子層囊泡，所以外泌體又被廣泛應(yīng)用于藥物遞送載體領(lǐng)域。

圖4 外泌體應(yīng)用領(lǐng)域

圖5 外泌體在癌癥中的應(yīng)用

圖6 外泌體在心血管疾病中的應(yīng)用

圖7 外泌體在免疫學(xué)中應(yīng)用

四、我的研究方案是什么？

圖8 外泌體研究思路

談到外泌體的研究，就不得不提到外泌體的純化，外泌體分離純化方法主要有以下幾種：

1）超速離心法：具有不同密度和尺寸的顆粒在離心力作用下表現(xiàn)出不同的沉積速度。是目前外泌體分離純化的“金標(biāo)準(zhǔn)"。
2）密度梯度離心：在介質(zhì)中離心后試管中的物體可以保持在密度相似的介質(zhì)位置。
3）超濾法：采用具有不同分子量截止點(diǎn)的超濾膜來選擇性分離樣品，在外泌體研究中經(jīng)常輔助分離。
4）尺寸排除色譜：加入多孔材料后物質(zhì)按其粒徑洗脫，大顆粒洗脫較早。
5）沉淀法：操作簡(jiǎn)單、快捷，外泌體回收率較高。
6）免疫捕獲法：基于外泌體標(biāo)記物和固定化抗體（配體）之間的特異性結(jié)合。
7）親和離心柱：外泌體與膜親和結(jié)合，利用洗脫液洗脫。

那么對(duì)于提取的外泌體，如何評(píng)價(jià)它的提取質(zhì)量呢？目前業(yè)界主要通過以下方法來評(píng)價(jià)外泌體的質(zhì)量：

1）Western Blot檢測(cè)特異性囊泡（如CD81、CD63）
2）NTA檢測(cè)囊泡粒徑分布。

對(duì)于外泌體的內(nèi)含物核酸研究，主要是通過qPCR或者NGS測(cè)序來進(jìn)行研究。

五、我的搭檔

愛必信緊跟研究潮流，推出外泌體相關(guān)產(chǎn)品以及組合方案以供各位科研工作者選擇：

表1 愛必信外泌體提取產(chǎn)品

對(duì)于外泌體的miRNA的定量分析，愛必信提供加尾法和莖環(huán)發(fā)來進(jìn)行miRNA的反轉(zhuǎn)錄，加尾法可將一個(gè)樣本中的所有的miRNA逆轉(zhuǎn)，檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，尤其對(duì)于微量樣本等非常友好；莖環(huán)法使用特殊的莖環(huán)引物，一次反轉(zhuǎn)只能檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)，特異性更強(qiáng)。后續(xù)采用的qPCR有染料法和探針法兩種可供選擇。

表2 miRNA逆轉(zhuǎn)錄+定量解決方案

表3 更多搭配推薦